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需氧性细菌分离培养法\厌氧菌的分离培养  

2007-05-14 14:47:01|  分类: 兽医知识大餐 |  标签: |举报 |字号 订阅

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需氧性细菌分离培养法

平板 芽孢需氧菌 利用化学药品的分离培养法

平板分离培养法需氧性细菌分离培养法厌氧菌的分离培养 - 但愿人生风调雨顺 - 非著名兽医王清玉博客

需氧性细菌分离培养法厌氧菌的分离培养 - 但愿人生风调雨顺 - 非著名兽医王清玉博客

图1-7-1

图1-7-2

 2.右手持接种环,将材料少许涂布于培养基边缘,然后将接种环上多余的材料在火焰中烧毁,当接种环冷却后,再与涂料之处轻轻接触,开始划线(图1-7-2)。

  3.划线时先将接种环稍稍弯曲,这样易和平皿内琼脂面平行,不致划破培养基。

  4.划线中不宜过多地重复旧线,以免形成菌苔。

芽孢需氧菌分离培养法

  若疑材料中有带芽孢的细菌,先将检查材料接种于一个管的液体培养基中,然后将它置于水浴箱中,加热到80℃维持15~20min,再行培养。材料中若有带芽孢的细菌仍可存活而发育生长,不耐热的细菌繁殖体则被杀灭。先做增菌培养,然后再按上述平板分离法分离培养。 

利用化学药品的分离培养法

  1.抑菌作用:有些药品对某些细菌有极强的抑制作用,而对另一些细菌则否,故可利用此种特性来进行细菌的分离,例如通常在培养基中加入结晶紫或青霉素抑制革兰氏阳性菌的生长,以分离革兰氏阴性菌。

  2.杀菌作用:将病料如结核病料加入15%硫酸溶液处理,其他杂菌均被杀死,结核菌因具有抗酸性而存活。

  3.鉴别作用:根据细菌对某种糖的分解能力,通过培养基中指示剂的变化来鉴别某种细菌。例如远藤氏培养基可以用作鉴别大肠杆菌与沙门氏菌。

  4.通过实验动物分离法:当分离某种病原菌时,可将被检材料注射于感受性强的实验动物体内,如将结核菌材料注射于豚鼠体内,杂菌不发育,而豚鼠最终必得慢性结核病而死。实验动物死后,取心血或脏器用以分离细菌。有时甚至可得到纯培养。

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厌氧菌的分离培养

生物学方法 物理学方法

厌氧菌需有较低的氧化还原电势能才能生长,在有氧的环境下,培养基的氧化还原电势较高,不适于厌氧菌的生长。为使培养基降低电势,降低培养环境的氧压是十分必要的。现有的厌氧培养法甚多,常用的主要是生物学和物理学方法,可根据各实验室的具体情况选用。

生物学方法中 培养基中含有植物组织(如马铃薯、燕麦、发芽谷物)或动物组织(新鲜无菌的小片组织或加热杀菌的肌肉、心、脑等),由于组织的呼吸作用或组织中的可氧化物质而消耗氧气,组织中所含的还原性化合物如谷胱甘肽也可以使氧化还原电势下降。另外,将厌氧菌与需氧菌共同培养在一个平皿内,利用需氧菌的生长将氧气消耗后,使厌氧菌能生长。其法是将培养皿的一半接种吸收氧气能力强的需氧菌,另一半接种厌氧菌,接种后将平皿倒扣在一块玻璃板上,并用石蜡密封,置37℃恒温箱中培养,2~3天后,即可观察到需氧菌和厌氧菌先后生长。

物理学方法 利用加热密封、抽气等物理学方法,以驱除或隔绝环境或培养基中的氧气,使形成厌氧状态,有利于厌氧菌的生长发育。

  1.厌氧罐法: 将接种好的厌氧菌培养皿依次放于厌氧罐中,先抽去部分空气,代以氢气至大气压。通电,使罐中残存的氧与氢经过铂或钯的催化而化合成水;使罐内氧气全部消失。将整个厌氧罐放入孵育箱培养。本法适用于大量的厌氧培养。

  2.真空干燥器法:将欲培养的平皿或试管放入真空干燥器中,开动抽气机,抽至高度真空后,替代以氢、氮或二氧化碳气体。将整个干燥器放进孵育箱培养。

  3.高层琼脂法:加热融化高层琼脂,冷至45℃左右接种厌氧菌,迅速混合均匀。冷凝后37℃孵育,厌氧菌在近管底处生长。 

  4.加热密封法:将液体培养基放在阿诺氏蒸锅内加热10min,驱除溶解于液体中的空气,取出,速置于冷水中冷却。接种厌氧菌后,在培养基液面被覆一层约0.5cm的无菌凡士林石蜡,置37℃孵育。

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